一、简介
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有“嗜肉菌”的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。
典型的金黄色葡萄球菌为球形，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。革兰阳性菌，无芽孢、无鞭毛，体外培养时一般不形成荚膜，但少数菌株的细胞壁外层可见有荚膜样粘液物质。在某些化学物质（青霉素）作用下，可裂解或变成L型。
金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃，最适生长pH7.4。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。血平板上菌落周围形成透明的溶血环。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10%-15%NaCl肉汤中生长。耐热性强，加热70℃1h，80℃30min不被杀死；耐低温，在冷冻食品中不易死亡；耐高渗，在含有50%-66%蔗糖或15%以上食盐食品中才可被抑制，能在15%NaCl和40%胆汁中生长。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。
二、检测要求
食品、药品、化妆品等相关标准中，均要求对金黄色葡萄球菌进行检测。通常情况下，仅要求对样品中有无金黄色葡萄球菌进行定性判断，但有时候也会有定量检测的要求。有关金黄色葡萄球菌定性检测的操作，可参考：金黄色葡萄球菌的简单介绍 点击查看，本文主要对金黄色葡萄球菌的定量检测方法进行讨论。
三、检验方法
参考标准《GB4789.10-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》
1.平板计数法
1.1 对于金黄色葡萄球菌含量较多的样品，通常采用平板计数法进行定量检测。其检测程序如下（图1）：
图1 金黄色葡萄球菌平板计数法检验程序
1.2 金黄色葡萄球菌及常见菌在Baird-Parker平板上的菌落特征
金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上呈圆形，表面光滑、凸起、湿润、菌落直径为2mm～3mm，颜色呈灰黑色至黑色，有光泽，常有浅色（非白色）的边缘，周围绕以不透明圈（沉淀），其外常有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感。有时可见到不分解脂肪的菌株,除没有不透明圈和清晰带外，其他外观基本相同。
从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落，其黑色常较典型菌落浅些，且外观可能较粗糙，质地较干燥。同属的表皮葡萄球菌在Baird-Parker平板上，也为黑色菌落，但无浑浊带和透明圈（如图2）。
| 金黄色葡萄球菌 | 表皮葡萄球菌 |
在Baird-Parker平板上，普通变形杆菌为黑色圆形菌落，有浑浊带及透明圈，浑浊带较大；奇异变形杆菌则为褐色圆形菌落，边缘绕一较小的透明带；大肠埃希氏菌则是被抑制，不能生长（如图3）
| 普通变形杆菌 | 奇异变形杆菌 | 大肠杆菌 |
1.3 鉴定
从典型菌落中至少选5个可疑菌落（小于5个全选）进行鉴定试验。分别做染色镜检，血浆凝固酶试验，同时划线接种到血平板36℃±1℃培养18h～24h后观察菌落形态，金黄色葡萄球菌菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。
1.4 结果计算
（1）若只有一个稀释度平板的典型菌落数在20CFU～200CFU之间，计数该稀释度平板上的典型菌落；若最低稀释度平板的典型菌落数小于20CFU，计数该稀释度平板上的典型菌落；若某一稀释度平板的典型菌落数大于200CFU，但下一稀释度平板上没有典型菌落，计数该稀释度平板上的典型菌落；若某一稀释度平板的典型菌落数大于200CFU，而下一稀释度平板上虽有典型菌落但不在20CFU～200CFU范围内，应计数该稀释度平板上的典型菌落，上面几种情况得出的菌落数，代入公式①，计算出样品中金黄色葡萄球菌的数量，进行报告。
公式①
（2）若2个连续稀释度的平板典型菌落数均在20CFU～200CFU 之间，按公式②计算。
公式②
2.MPN法
2.1 对于含金黄色葡萄球菌菌量较多的样品，通常MPN计数法进行定量检测。其检验程序如图4：
图4 金黄色葡萄球菌MPN法检验程序
2.2 与平板计数法相比，本方法在样品稀释后增加了一个增菌过程，其原因正是由于样品中金黄色葡萄球菌数量较少，需要通过选择性增菌过程让菌数增多，再进行下一步检测。
该增菌过程使用了7.5%NaCl肉汤，也是很好地利用了金黄色葡萄球菌耐高盐的特性，在有效抑制其他杂菌的同时，让金黄色葡萄球菌正常生长增殖。
2.3本步骤中的鉴定试验，与平板法基本一致，包括血平板划线、血浆凝固试验并借助革兰氏染色、镜检等方法（具体做法和特征，均可参考金黄色葡萄球菌定性检验的简单介绍 点击查看），根据阳性管的支数查找金黄色葡萄球菌的数目进行结果报告。
四、注意事项
在进行金黄色葡萄球菌检验的过程中，需要注意以下几点：
（1）配制Baird-Parker琼脂基础培养基时，一定要注意加入亚碲酸钾卵黄乳液时，培养基的温度不能太高，以免影响亚碲酸钾的作用，或者导致卵黄絮凝。
（2）在观察Baird-Parker平板上的菌落特征时，一定要注意金黄色葡萄球菌具有“双环”，即一圈浑浊带，外侧有一透明环。只有单环浑浊带的一般是变形杆菌。
（3）在进行血浆凝固试验时要注意：可疑菌落需同时接种在5ml的BHI肉汤中和营养琼脂上；必须使用新鲜的BHI肉汤培养物；加入BHI肉汤培养物后，要轻轻转动瓶身至混合均匀；试验应每半小时观察一次，不可直接观察第6h后的结果。一些金葡菌能够产生蛋白酶来分解纤维蛋白，而出现先凝集而后消融的情况，保证每半小时观察一次，防止因观察不及时，而误判成假阴性。
（4）观察凝固情况时，采用将西林瓶缓慢倾斜或倒置的方式。当凝固体积大于原体积一半，即可判为阳性。切记不要采用摇晃的方式进行观察！
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