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TCBS琼脂的试验原理、方法及结果

刘凯凤
录入时间:2021-5-21 15:11:31 来源:青岛银河澳门官网入口

一、试验原理

 TCBS琼脂用于致病性弧菌的选择性分离(GB、SN标准)。成分中的酵母浸粉、蛋白胨提供菌体生长所需的氮源、碳源及维生素等各种生长因子;较高浓度的氯化钠提供了弧菌嗜盐生长的环境,其形成的高渗透压抑制了其他细菌的生长;蔗糖是可发酵碳源;枸橼酸钠、高pH碱性环境及硫代硫酸钠的存在抑制肠道菌的生长,另硫代硫酸钠还提供硫源,在柠檬酸铁存在的条件下可以检测细菌产硫化氢;牛胆粉、牛胆酸钠主要抑制革兰氏阳性菌的生长;溴麝香草酚兰和麝香草酚兰作为酸碱指示剂,在该平板上生长的细菌若能利用蔗糖产酸,则使得混合指示剂(溴麝香草酚兰和麝香草酚兰)的颜色变成黄色;琼脂起凝固的作用。


二、培养基配方(g/L)


酵母浸粉

5.0

蛋白胨

10.0

硫代硫酸钠

10.0

枸橼酸钠

10.0

牛胆粉

5.0

牛胆酸钠

3.0

蔗糖

20.0

氯化钠

10.0

柠檬酸铁

1.0

溴麝香草酚兰

0.04

麝香草酚兰

0.04

琼脂

15.0

pH值8.5-8.7 25℃


三、试验方法


 1.称取本品89g,煮沸溶解于1000mL蒸馏水(可根据培养需要扩大或缩小产品用量),冷至45-50℃,倾入无菌平皿,备用;

 2.质控菌液按国标等标准或其它方法制备而成;

 3.取相应菌液按涂布或划线方式接种于培养基中;

 4.将接好菌的平板倒置放入恒温培养箱,于36±1℃需氧培养18-24h,观察实验结果。


四、试验结果判断

 1.外观

 此培养基煮沸灭菌后制备好的固体平板为绿色。

 2.生物学实验

 接种以下质控菌株,放入培养箱中,于36±1℃培养24±2h,观察试验结果。

质控菌株

菌株编号

接种量(CFU)

参比或计数培养基

方法

质控情况

副溶血性弧菌

ATCC17802

20-200

3%NaCl TSA

定量

PR≥0.2,蓝绿色斗笠状菌落,H2S阴性

溶藻弧菌

ATCC33787

20-200

3%NaCl TSA

定量

PR≥0.2,黄色菌落,H2S阴性

霍乱弧菌

/

20-200

3%NaCl TSA

定量

PR≥0.2,黄色菌落,H2S阴性

金黄色葡萄球菌

ATCC25923

/

/

半定量

G≤1

大肠埃希氏菌

ATCC25922

/

/

半定量

G≤1

 TCBS琼脂微生物质控结果:






副溶血性弧菌

蓝绿色斗笠状菌落,H2S阴性


溶藻弧菌

黄色菌落,H2S阴性


霍乱弧菌

黄色菌落,H2S阴性

  

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注:本文属银河澳门官网入口原创,未经允许不得转载。

 

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