一、试验原理
TCBS琼脂用于致病性弧菌的选择性分离（GB、SN标准）。成分中的酵母浸粉、蛋白胨提供菌体生长所需的氮源、碳源及维生素等各种生长因子；较高浓度的氯化钠提供了弧菌嗜盐生长的环境，其形成的高渗透压抑制了其他细菌的生长；蔗糖是可发酵碳源；枸橼酸钠、高pH碱性环境及硫代硫酸钠的存在抑制肠道菌的生长，另硫代硫酸钠还提供硫源，在柠檬酸铁存在的条件下可以检测细菌产硫化氢；牛胆粉、牛胆酸钠主要抑制革兰氏阳性菌的生长；溴麝香草酚兰和麝香草酚兰作为酸碱指示剂，在该平板上生长的细菌若能利用蔗糖产酸，则使得混合指示剂（溴麝香草酚兰和麝香草酚兰）的颜色变成黄色；琼脂起凝固的作用。
二、培养基配方（g/L）
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酵母浸粉 |
5.0 |
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蛋白胨 |
10.0 |
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硫代硫酸钠 |
10.0 |
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枸橼酸钠 |
10.0 |
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牛胆粉 |
5.0 |
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牛胆酸钠 |
3.0 |
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蔗糖 |
20.0 |
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氯化钠 |
10.0 |
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柠檬酸铁 |
1.0 |
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溴麝香草酚兰 |
0.04 |
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麝香草酚兰 |
0.04 |
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琼脂 |
15.0 |
| pH值8.5-8.7 | 25℃ |
三、试验方法
1.称取本品89g，煮沸溶解于1000mL蒸馏水（可根据培养需要扩大或缩小产品用量），冷至45-50℃，倾入无菌平皿，备用；
2.质控菌液按国标等标准或其它方法制备而成；
3.取相应菌液按涂布或划线方式接种于培养基中；
4.将接好菌的平板倒置放入恒温培养箱，于36±1℃需氧培养18-24h，观察实验结果。
四、试验结果判断
1.外观
此培养基煮沸灭菌后制备好的固体平板为绿色。
2.生物学实验
接种以下质控菌株，放入培养箱中，于36±1℃培养24±2h，观察试验结果。
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质控菌株 |
菌株编号 |
接种量（CFU） |
参比或计数培养基 |
方法 |
质控情况 |
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副溶血性弧菌 |
ATCC17802 |
20-200 |
3%NaCl TSA |
定量 |
PR≥0.2，蓝绿色斗笠状菌落，H2S阴性 |
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溶藻弧菌 |
ATCC33787 |
20-200 |
3%NaCl TSA |
定量 |
PR≥0.2，黄色菌落，H2S阴性 |
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霍乱弧菌 |
/ |
20-200 |
3%NaCl TSA |
定量 |
PR≥0.2，黄色菌落，H2S阴性 |
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金黄色葡萄球菌 |
ATCC25923 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
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大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
TCBS琼脂微生物质控结果：
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副溶血性弧菌 蓝绿色斗笠状菌落，H2S阴性 |
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溶藻弧菌 黄色菌落，H2S阴性 |
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霍乱弧菌 黄色菌落，H2S阴性 |
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