银河澳门官网入口,银河集团网址登录

银河澳门官网入口,银河集团网址登录

中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服热线:400-0532-596
微生物技术资料
文章检索
  首页 > 微生物知识->真菌基本知识和检测方法->用于酵母繁殖和筛选的培养基

用于酵母繁殖和筛选的培养基



录入时间:2006-6-26 11:51:06 来源:其它

   
   用于酵母繁殖和筛选的培养基
 
 
注意:有关标记<!>符号的材料的恰如其分的操作见附录12。
重要:在所有配方中使用蒸馏去离子水。除非另有说明,培养基和溶液在15 psi(1.05kg/cm2)高压下蒸汽灭菌15-20min。
 
完全基本培养基(CM)或合成完全培养基(SC)和营养缺陷型培养基
为了确定菌株生长的必需条件,采用相应的营养缺陷型培养基是非常有用的。培养基补料的干粉是各自分开保存的,可以方便地配制相应的营养缺陷型培养基。CM(或SC)是含有所有生长成分的培养基(也就是说,没有一种营养成分缺陷)。
无氨基酸酵母氮源(市售的无氨基酸酵母氨源(YNB)分含硫酸胺和不含硫酸胺两种。此配方所用YNB系含硫酸胺的。如果你手头的YNB不含硫酸胺,则只加1.7g YNB,另加5g硫酸胺即可。)    6.7g
葡萄糖    20g
琼脂粉    20g
营养缺陷混合物    2g
H2O    to 1000 ml
 
营养缺陷混合物(Drop-out Mix)
减去有关的补料,  混合适当的成分,在密封的容器中混合。来回倒置转动容器至少15 min;加入几粒干净的大理石,以助于固体的混合。
腺嘌呤(Adenine)    0.5g
丙氨酸(Alanine)    2.0g
精氨酸(ArSinine)    2.0g
天冬酰胺(Asparagine)    2.0g
天冬氨酸(AsPanic acid)    2.0g    
半胱氨酸(Cysteine)    2.0g
谷氨酰胺(Glatamine)    2.0g
谷氨酸(Glutsmic acid)    2.0g
甘氨酸(GIycine)    2.0g
组氨组(Histidine)    2.0g
肌醇(Inositol)    2.0g
异亮氨酸(Isoleucine)    2.0g
亮氨酸(Leudne)    10.0g
赖氨酸(Lysine)        2.0g
甲硫氨酸(Methionine)    2.0g
对氨基苯甲酸(para-Aminobenzoic acid)  0.2g
苯丙氨酸(Phenylalanine)    2.0g
脯氨酸(Proline)    2.0g
丝氨酸(Serine)    2.0g
苏氨酸(Threonine)    2.0g
色氨酸(Tryptophan)    2.0g
酪氨酸(Tyrosine)    2.0g
尿嘧啶(Uracil)    2.0g
缬氨酸(Valine)    2.0g
摘录于Adams等人(1998)的资料。
 
    表A2.3  补加基本培养基的成分
成分
 贮存液浓度/(g/100ml)
 1L中所加贮存培养基的体积/ml
 培养基中最终浓度/(mg/L)
 涂布在乎板上所需贮存液的体积/ml
 
腺嘌呤硫酸盐
 0.2a
 10
 20
 0.2
 
尿嘧啶
 0.2a
 10
 20
 0.2
 
L—色氨酸
 1
 2
 20
 0.1
 
l—组氨酸HCl
 1
 2
 20
 0.1
 
L—精氨酸LiCl
 1
 2
 20
 0.1
 
L—甲硫氨酸
 1
 2
 20
 0.1
 
L—酪氨酸
 0.2
 15
 30
 0.2
 
L—亮氨酸
 1
 10
 109
 0.1
 
L—异亮氨酸
 1
 3
 30
 0.1
 
L—赖氨酸HCl
 1
 3
 30
 0.1
 
L—苯丙氨酸
 1a
 5
 50
 0.1
 
L—谷氨酸
 1a
 10
 100
 0.2
 
L—天冬氨酸
 1a,b
 10
 100
 0.2
 
L—缬氨酸
 3
 5
 150
 0.1
 
L—苏氨酸
 4a,b
 5
 200
 0.1
 
L—丝氨酸
 8
 5
 400
 0.1
 
注:a:室温保存;b:培养基高压灭菌后再加入。
 
补加的基本培养基(SMM)
SMM是加入各种生长补料的合成葡萄糖基本培养基(SD)。这些溶液可长期存放。某些溶液应在室温保存以防发生沉淀,而其他的溶液可能需要冷冻。无论如何,应优先选用氨基酸的盐酸盐。 
将适当体积的贮存液加到SD培养基的配料中以配制培养基,而后用蒸馏水调节终体积至1L。高压灭菌后分别加苏氨酸和天冬氨酸溶液。
通常方便的配制SMM培养基的替代办法是,将少量补料涂布在SD平板的表面。补料液在平板上完全干燥后再接种酵母菌。
表A2-3给出了贮存液的浓度,配制1L培养基所需的贮存液的体积,涂在SD平板上所需贮存液的体积以及在SMM中每种成分的最终浓度。
合成的葡萄糖基本培养基(SD)
SD是含有盐类、微量元素、维生素、氮源(不含氨基酸的酵母氮碱)和葡萄糖的合成基本培养基。
不含氨基酸酵母氮源(见CM配方说明)    6.7g
葡萄糖    20g
细菌培养用琼脂    20g
加水    ~1000ml
用于酵母的X-gal指示平板
因为在SD培养基的正常酸性pH条件下,5—溴—4—氯—3—吲哚—p—D—半乳糖苷(X—gal<!>)对酵母菌不起作用,故使用中性pH的培养基。这种选择完全是一种权宜之计。因为许多酵母菌株在中性pH时生长不好。为配制每升X-gal指示平板,需制备下述溶液。
溶液I
10×磷酸缓冲液贮存液    100ml
1000×无机盐贮存液(见下面配方)    1ml
drop-out混合物(见上述)    2g
如果培养基中含有葡萄糖,用蒸馏水调节体积至450ml;若培养基中含有半乳糖,用蒸馏水调节体积400 ml。
l0×磷酸缓冲液贮存液
KH2PO4(1 mol/L)    136.1 g
 (NH4)2SO4(0.15 mol几)    19.8 g
KOH(0.75mol/L)(!)    42.1 g
加水至1 000ml
调pH值至7.0并高压灭菌。
1000×无机盐贮存液
FeCl3(2mmol/L)    32mg
MgSO4·7H2O(0.8 mol/L)    19.72g    
加水至100ml
高压灭菌并贮存备用。这种溶液会出现细小的黄色沉淀,用前应重新悬浮。
 
溶液Ⅱ
在一个2L的烧瓶中混合:
细菌培养用琼脂    20g
蒸馏去离子水    500ml
·溶液I和溶液Ⅱ分开高压。
·冷却至65℃以下时将下述成分加到溶液I中:
    葡萄糖或其他糖类加至终浓度为2%
    X-gal(20mg/ml,  用二甲基甲酰胺<!>溶解)  2ml
    100×维生素贮存液    10ml
.这时包含任何其他的热敏感补料。
.将溶液I和溶液Ⅱ混合在一起,每个平板铺30ml左右。
    100×维生素贮存液
    维生素B1(硫胺素)(0.04 mg/m1)    4 mg
    生物素(2/ug/ml)    0.2mg
    维生素B6(0.04 mg/ml)    4mg
    肌醇(0.2mg/ml)    20mg
    维生素B3(泛酸)(0.04mg/ml)    4mg
    H2O    100 ml
    用0.22/lm的滤器过滤除菌。
 
用于在滤膜上裂解酵母细胞的X-gal平板
这些平板是用来检测在Whatman 3MM滤纸上裂解和固定的细胞中的β-半乳糖苷
酶的活性。
细菌培养用琼脂    20g
1 mol/L Na2HPO4  57.7 ml
1 mol/L NaH2PO4 42.3 ml
MgSO4    0.25 g
H2O    900 ml
高压灭菌后,加6ml X-gal溶液(20mg/ml,用二甲基甲酰胺配置)。
 
YPD(YEPD)培养基
YPD是用于酵母常规生长的复合培养基。
酵母提取物    10g
蛋白胨    20 g
葡萄糖    20g
加水至    1000 ml
制备平板时,在高压灭菌前加入20 g细菌培养用琼脂(终浓度为2%)。
 

 

上一篇:霉菌和酵母菌介绍及检测方法

下一篇:酵母菌的形态观察

首页 | 关于我们 | 网上商城 | 在线客服 | shchuhu.com
业务联系电话
   400-0532-596 0532-66087773
   0532-66087762 0532-81935169
邮箱:qdhbywg@vip.126.com
地址:青岛市城阳区锦汇路1号A2栋
产品技术咨询
  工作日(周一至周六8:00-18:00):
  18562658263 13176865511
  其它时段:13105190021
投诉与建议:13105190021 13006536294