一、大肠菌群简介
大肠菌群是指一群在37℃培养24h发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。主要由肠杆菌科中四个属内的一些细菌所组成，即埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属以及肠杆菌属。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
二、试验原理
MUGal培养基可用于大肠菌群快速检测。培养基中的胰蛋白胨作为培养基中的基础营养物质，提供细菌生长所需的碳氮源、维生素和其他的生长因子；氯化钠维持培养基体系的渗透压平衡；磷酸二氢钾和磷酸氢二钾是培养基pH缓冲剂；月桂基硫酸钠抑制革兰氏阳性菌；大肠菌群可产生β-半乳糖苷酶，分解液体培养基中的酶底物4-甲基伞形酮-β-D-半乳糖苷MUGal，使4-甲基伞形酮游离，在波长366nm紫外灯照射下呈现蓝色荧光。
三、培养基配方（g/L）
| 胰酪蛋白胨 | 20.0 |
| 氯化钠 | 5.0 |
| 磷酸氢二钾 | 2.75 |
| 磷酸二氢钾 | 2.75 |
| 月桂基硫酸钠 | 0.1 |
| MUGal | 0.05 |
| pH值7.0-7.2 | 25℃ |
四、试验方法
1.称取本品30.7g，加热搅拌溶解于1000mL蒸馏水中，分装于20mm×150mm试管中，每管9mL，116℃高压灭菌10分钟，待培养基冷却后，以无菌操作于每管培养液内加入0.1mL经无菌水稀释的500ug/ml头孢磺啶液，备用。
2.10倍梯度稀释法制备质控菌液。
3.选择合适稀释度的质控菌液100μL，接种到试管中，每一稀释度接种两个平行管；同时吸取稀释液100μL，接种到试管中作为空白对照。
4.放置36±1℃需氧培养24-48小时，记录试验结果。
五、试验结果判断
接种以下质控菌株，放置36±1℃需氧培养18-24小时。
|
质控菌株 |
菌株编号 |
接种量（CFU） |
方法 |
生长情况 |
其他特征 |
|
大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
10-100 |
定量 |
+++ |
浑浊，产荧光 |
|
产气肠杆菌 |
CMCC(B)45103 |
10-100 |
定量 |
+++ |
浑浊，产荧光 |
|
鼠伤寒沙门氏菌 |
ATCC14028 |
10-100 |
定量 |
+++ |
浑浊，不产荧光 |
|
金黄色葡萄球菌 |
ATCC6538 |
100-1000 |
定量 |
- |
抑制 |
MUGal培养基质控结果：
|
正常光线下 |
 |
| a:空白对照；b:大肠杆菌；c:产气肠杆菌；d:鼠伤寒沙门氏菌；e:金黄色葡萄球菌 |
|
|
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366nm紫外灯照射下 |
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|
a:空白对照；b:大肠杆菌；c:产气肠杆菌；d:鼠伤寒沙门氏菌；e:金黄色葡萄球菌
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