一、培养基用途
用于生活饮用水及其水源水中粪大肠菌群测定。
二、试验原理
胰蛋白胨、多价蛋白胨和酵母粉提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；乳糖为可发酵糖类；3号胆盐抑制革兰氏阳性菌；琼脂是培养基的凝固剂；苯胺蓝和玫红酸为pH指示剂。
粪大肠菌群可在44.5℃条件下分解乳糖产酸，使培养基pH下降，菌落为亮蓝色，其他不发酵乳糖的肠道菌菌落为无色、灰色或淡红色。
三、培养基配方（g/L）
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多价蛋白胨 |
5.0 |
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胰蛋白胨 |
10.0 |
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乳糖 |
12.5 |
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酵母粉 |
3.0 |
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三号胆盐 |
1.5 |
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氯化钠 |
5.0 |
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苯胺蓝 |
0.2 |
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琼脂 |
15.0 |
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玫红酸 |
0.1 |
| pH值7.4±0.2 | 25℃ |
四、试验方法
1.称取本品52.3g，加热煮沸溶解于1000ml蒸馏水中，冷却至45-50℃左右时，倾入无菌平皿，备用。无需高压灭菌。
2.制备好的平板保存于2-8℃，应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处，室温保存。
3.使用前，把制备好的平板放置室温10-20分钟。
4.制备质控菌液。选择合适稀释度的质控菌液0.1ml，均匀涂布于待测平板以及参比平板上，每一稀释度接种两个平板。
5.用1μL接种环取非目标菌质控菌液1环，将接种环接触容器边缘3次，去除多余液体，在平板表面划六条平行直线，同时接种两个平板。
6.44.5℃倒置培养基培养24±2小时，记录实验结果。
五、结果观察与解释
接种以下质控菌株，44.5℃倒置培养基培养24±2小时：
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质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
参比或计数培养基 |
方法 |
质控评定标准 |
其他特征 |
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大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
20-200 |
TSA |
定量 |
PR≥0.7 |
蓝色菌落 |
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鼠伤寒沙门氏菌 |
ATCC14028 |
20-200 |
PR≥0.7 |
无色菌落 |
||
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福氏志贺氏菌 |
ATCC12022 |
20-200 |
PR≥0.7 |
无色菌落 |
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产气肠杆菌 |
ATCC13048 |
20-200 |
PR≥0.7 |
灰色菌落 |
||
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金黄色葡萄球菌 |
ATCC25923 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
/ |
MFC琼脂微生物质控结果：
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大肠埃希氏菌 蓝色菌落 |
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鼠伤寒沙门氏菌 无色菌落 |
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福氏志贺氏菌 无色菌落 |
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产气肠杆菌 灰色菌落 |
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金黄色葡萄球菌 抑制 |
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六、注意事项
本培养基仅为细菌鉴定的一部分，需做其他补充试验。
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