一、用途

 本产品符合中国药典标准，用于磺苄青霉素效价测定。

二、检验原理

 本法是利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，抑菌圈直径与抗生素的浓度或活性相关；比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。

三、培养基配方（g/L）

此配方可以进行改良或增加营养成分以获得最佳的结果

四、操作步骤

 1、称取本品26.0g，加热搅拌溶解于1000ml纯化水中，116℃高压灭菌20分钟，备用；

 2、菌悬液的制备。枯草芽孢杆菌（CMCC(B)63501）：取枯草芽孢杆菌（CMCC(B)63501）的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在35-37℃培养7日，用革兰氏染色法涂片镜检，应有芽孢85%以上。用灭菌水将芽孢洗下，在65℃加热30分钟，备用；

 3、取平板分别注入加热融化的培养基20ml，放置水平台面上使凝固，作为底层。另取培养基适量培养基，放冷至48-50℃加入规定的试验菌悬液适量，摇匀。在平板中分别加入5ml，使在底层上均匀摊布，作为菌层，放置在水平台上冷却凝固。

 4、在平板中放置牛津杯。用无菌镊子夹住HB四连式牛津杯正面的凸点，将其放置在菌层培养基表面上，如图1；将压杯板盖上，压住牛津杯5秒左右，使4个小杯与培养基表面紧密接触，防止出现缝隙导致漏液，然后小心拿走压杯板。如图2。

图1	图2

 5、在每一平板中小管中分别滴加标准品溶液，如图3；转移至培养箱35-37℃培养14-16小时，记录实验结果。如图4。

图3	图4

五、微生物试验

 接种以下质控菌株，在36±1℃培养14-16小时：

质控菌株	菌株编号	接种量(CFU)	生长情况	其他特征
枯草芽孢杆菌	CMCC(B)63501	/	+++	抑菌圈大小18mm-22mm

  抗生素检定培养基I号（低pH）质控结果：

六、注意事项

 1、注入培养基总量不大于20ml，否则放置牛津杯后平皿盖无法盖紧。

 2、菌量浓度适宜，若菌量浓度过小，则菌层生长弱做不出抑菌圈。

 3、菌层培养基表面一定要平整，否则会导致牛津杯漏液。

 4、HB四连式牛津杯中央有凸点且平衡翼上标有“银河澳门官网入口”字体的为产品正面。

 5、压杯板已经辐照灭菌，可以直接使用；多次使用，可用酒精棉擦拭即可。

 6、将平皿转移至培养箱培养过程中轻拿轻放，避免剧烈震动，不要堆置培养，以免影响实验效果。

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