一、参考标准
《SN/T 2552.8-2010 乳及乳制品卫生微生物学检验方法 第8部分：普通变形杆菌和奇异变形杆菌检验》
二、生物学特性
变形杆菌为能活泼运动而又极为多形性的一群肠道菌，有球形和丝状形，具有鞭毛、无荚膜、无芽胞、革兰氏阴性，运动活泼。在固体培养基上呈扩散生长，形成迁徙生长现象。
三、检验程序
图1 普通变形杆菌和奇异变形杆菌检验程序
四、检验方法和结果
1、选择性增菌
普通变形杆菌和奇异变形杆菌在GN增菌液中36℃±1℃培养18-24h后生长浑浊，如图2所示：
a:空白对照；b:普通变形杆菌；c:奇异变形杆菌
图2 GN增菌液的培养结果
2、初步生化鉴定
①SS琼脂试验
取增菌液1环，划线接种于SS平板上，于36℃±1℃培养18-24h，普通变形杆菌和奇异变形杆菌在SS平板上的典型菌落为：1mm-2mm大小、无色半透明或有黑色中心，边缘整齐，表面光滑的圆形菌落，如下图所示：
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a:奇异变形杆菌 |
b:普通变形杆菌 |
②克氏双糖培养基试验
挑取SS平板上的可疑菌落，穿刺接种混合克氏双糖铁斜面，接种时先在斜面划线，然后再穿刺到底层放入培养箱36℃±1℃培养18-24h，普通变形杆菌和奇异变形杆菌的试验现象为：斜面红/底层黄（部分区域黑色），发酵葡萄糖但不发酵乳糖同时产生硫化氢和产气，如图3所示。
注意：能产生硫化氢的菌应及时观察试验结果，以免生成的硫化铁形成黑色区域，遮盖斜面与底层的颜色影响判断结果。
a:空白对照；b:普通变形杆菌；c:奇异变形杆菌
图3 克氏双糖的培养结果
③尿素琼脂试验
挑取SS平板上的可疑菌落，穿刺接种尿素琼脂斜面，接种时先在斜面划线，然后再穿刺到底层放入培养箱36℃±1℃培养18-24h，普通变形杆菌和奇异变形杆菌的试验现象为尿素培养基变玫红，如图4所示：
空白对照；b:普通变形杆菌；c:奇异变形杆菌
图4 尿素培养基的培养结果
④苯丙氨酸脱氨酶培养基试验
挑取SS平板上的可疑菌落，接种在苯丙氨酸脱氨酶培养基斜面划线，然后放入培养箱36℃±1℃培养18-24h，培养结束后滴加4-5滴苯丙氨酸指示剂，使其覆盖培养基表面，1min-5min呈现绿色则为阳性，如图5所示：
a:空白对照；b:普通变形杆菌；c:奇异变形杆菌
图5 苯丙氨酸脱氨酶培养基的培养结果
3、进一步的生化鉴定
符合上一步要求的可疑菌落需进一步进行其他生化试验。
①靛基质试验
将菌接种于胰蛋白水培养基中，放入培养箱36℃±1℃培养18-24h，滴加Kovacs氏靛基质试剂，立即观察反应结果。普通变形杆菌为玫红色环，为阳性；奇异变形杆菌为黄色环，为阴性，如图6所示：
a:空白对照；b:奇异变形杆菌；c:普通变形杆菌；
图6 靛基质的培养结果
②鸟氨酸脱羧酶试验
将菌接种于鸟氨酸脱羧酶生化管中，加无菌液体石蜡覆盖培养基液体表面，放入培养箱36℃±1℃培养18-24h，接种普通变形杆菌的培养基呈阴性，培养基变黄；接种奇异变形杆菌的培养基呈阳性，培养基为紫色，如图7所示：
a:空白对照；b:奇异变形杆菌；c:普通变形杆菌
图7 鸟氨酸脱羧酶的培养结果
③甘露醇试验
将菌接种于鸟氨酸脱羧酶生化管中，放入培养箱36℃±1℃培养18-24h，接种奇异变形杆菌和普通变形杆菌的培养基都呈阴性，培养基颜色为蓝色或蓝绿色，如图8所示：
a:空白对照；b:奇异变形杆菌；c:普通变形杆菌
图8 甘露醇的培养结果
④氧化酶试验
变形杆菌氧化酶试验不变色，为阴性，铜绿假单胞菌为阳性变蓝，如图9所示：
a:铜绿假单胞菌10104；b:奇异变形杆菌
图9 鸟氨酸脱羧酶的培养结果
注：普通变形杆菌和奇异变形杆菌生化鉴定表如下：
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生化反应 |
明胶液化 |
甘露醇 |
靛基质 |
鸟氨酸脱羧酶 |
麦芽糖 |
木糖 |
鼠李糖 |
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普通变形杆菌 |
+ |
- |
+ |
- |
+ |
+ |
- |
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奇异变形杆菌 |
+ |
- |
- |
+ |
- |
+ |
- |
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