一、实验目的

  为了准确评价消毒剂对微生物的灭杀作用，消毒剂试验中要求选择适当中和剂，所选中和剂不仅能及时中止消毒剂的杀微生物作用，且中和剂本身及其与消毒剂的反应产物（以下称中和产物）尚需对微生物无抑制或灭杀作用，对培养基无不良影响。

二、实验方法

  1、用接种环挑取指示菌接入PBS中制成适量浓度的菌悬液；

  2、将消毒液用灭菌蒸馏水配制成3种不同浓度，在不加中和剂的情况下，测知消毒剂10min抑杀指示菌的最低有效浓度；

  3、取消毒剂10min抑杀指示菌的最低有效浓度与待选择中和剂进行试验，选出中和剂种类并依据等当量中和原则，调整中和剂浓度，选出试验浓度的消毒剂使用中和剂的浓度；

  4、在进行中和剂选择试验时，先将消毒剂1ml与中和剂溶液9ml混合，制成中和产物溶液。

加入消毒剂混匀前

左：复方中和剂 右：生理盐水

加入消毒剂混匀后

左：中和产物 右：生理盐水

  5、现以复方中和剂为例，按照下表所示进行试验：

组号	0.5ml菌液加于	混匀作用10min	取0.5ml混匀液加入 （加入后总量为5ml）	作用10min后 取原液或者稀释液0.5ml接种平板（2个/样本）
1	消毒液4.5ml		PBS 4.5ml	原液*10
2	消毒液4.5ml		中和剂4.5ml	原液*10
3	中和产物4.5ml		PBS 4.5ml	*100，*1000
4	PBS 4.5ml		PBS 4.5ml	*100，*1000
5	中和剂4.5ml		PBS 4.5ml	*100，*1000
6			PBS 5.0ml	原液

混匀作用前

1：消毒液4.5ml 2：消毒液4.5ml 3：中和产物4.5ml 4：PBS 4.5ml 5：中和剂4.5ml

混匀作用后

1：PBS 4.5ml 2：中和剂4.5ml 3：PBS 4.5ml 4：PBS 4.5ml 5：PBS 4.5ml 6：PBS 5.0ml

  6、中和实验结果举例（以复方中和剂为例）：

三、实验结论及判定标准

  1、根据数据显示，3、4、5组菌数相似，其误差率小于等于10%。

  2、6组无菌生长。

  3、1组不长菌或者明显少于2组。

  符合上述标准的中和剂表明可消除消毒剂对指示菌的作用，中和剂及其与消毒剂中和产物对指示菌无毒害，判定为该消毒剂的中和剂。

四、补充实验

  使用中消毒液染菌量检查方法：

  1、用移液枪按照无菌操作方法吸取1ml被检消毒液，加入9ml中和剂混匀；

  2、按照无菌操作使用移液枪吸取中和产物1ml接种平皿，将冷至40℃-45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15ml-20ml，36℃恒温箱培养72h，计数菌落。

   消毒液染菌量（CFU/ml）=平均每皿菌落数*10*稀释倍数

  注意事项：醇类与酚类消毒剂用普通营养肉汤中和，含氯消毒剂、含碘消毒剂和过氧化物消毒剂用含0.1%硫代硫酸钠中和剂，洗必泰、季铵盐类消毒剂用含0.3%吐温80和0.3%卵磷脂中和剂，醛类消毒剂用含0.3%甘氨酸中和剂，含有表面活性剂的各种复方消毒剂可以在中和剂中加入吐温80至3%。

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