一、试验原理：

 用于细菌的革兰氏染色试验。

 通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此，能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。

二、培养基配方（g/L）：

 革兰氏染色液A液：

结晶紫 1.0g	95%乙醇	20.0ml
	1%草酸铵水溶液	80.0ml

 革兰氏染色液B液：

碘	1.0g
碘化钾	2.0g
蒸馏水	300ml

 革兰氏染色液C液：

95%乙醇

 革兰氏染色液D液：

沙黄	0.25g
95%乙醇	10.0ml
蒸馏水	90.0ml

三、试验方法：

 1.如果样品来自肉汤培养物：挑取1-2环肉汤培养基至洁净载玻片上，不需要涂布开，在空气中自然干燥样品液。如果样品来自平板培养物：用接种环挑取1环蒸馏水至洁净载玻片上，挑取一个单菌落，与蒸馏水混合均匀，涂布于载玻片上，尽可能涂布均匀，且不要太厚，空气中自然干燥菌液。

 2.涂布经火焰固定，加（结晶紫溶液）溶液A染1分钟，水洗。

 3.加（碘液）溶液B染色1分钟，水洗。

 4.加（脱色液）溶液C，不时摇动载玻片约10-30秒，至无紫色脱落为止，水洗。

 5.加（复染液）溶液D,染1分钟，水洗。

 6.干后油镜镜检。革兰氏阳性菌呈暗紫色至紫色，革兰氏阴性菌呈红色至淡红色。

四、结果观察与解释

 接种以下质控菌株：

 革兰氏染色液微生物质控结果：

五、注意事项

 本培养基仅为细菌鉴定的一部分，需做其他补充试验。

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