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唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)的检验

ss
录入时间:2020-9-9 14:14:47 来源:网络搜索

  今年8月,广东省一家肠粉店发生食物中毒,11名顾客吃了店内河粉后,出现呕吐、腹泻等症状。经调查,这起食物中毒的罪魁祸首是“椰毒假单胞菌”,中毒原因是因为某些菌株可以产生一种叫“米酵菌酸”的毒素,一旦吃了含有这种毒素的食物,就会表现为恶心、呕吐、腹泻、头晕、全身无力,严重时会出现黄疸、肝肿大、皮下出、呕血、惊厥抽搐等症状,最严重的会出现休克甚至死亡。

  “椰毒假单胞菌”,全称椰毒假单胞酵米面亚种Pseudomonas cocovenenans subsp.Farinofermentans,是—种存在于酵米面、变质鲜银耳及其他淀粉类发酵产品中的食源性致病菌。

  由于椰毒假单胞酵母菌酵米面亚种不是国际公开发表和承认的细菌分类科学名称,1999年划分为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌Burkholderiagladioli的一个病原型,目前现行标准GB/T 4789.29-2003《食品卫生微生物学检验椰毒假单胞菌酵米面亚种检验》。2018年9月国家卫生健康委员会发布的《食品安全国家标准食品微生物学检验唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)检验(征求意见稿)》中,将该菌进行更名,同时新增分离培养基mPDA同PCFA用于唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)的分离。

 

唐菖蒲伯克霍尔德氏菌检验流程图


 

一、前增菌以及选择性分离过程

前增菌:

淀粉类食品25g+225mLGVC增菌液,均质混匀,36土1℃,24-48h。

鲜银耳1g+20mL GVC增菌液,均质混匀,36土1℃,24-48h。

分离:

用直径3mm的接种环取增菌液一环,分别划线接种于mPDA平板和PCFA平板,36℃±1℃培养24 h~48 h。观察各个平板上生长的菌落。

mPDA平板

PCFA平板

 24-48h,紫色、光滑、湿润、边缘整齐

培养48h后,部分菌落中心可有凸起呈草帽状

  24-48h,灰白色,光滑、湿润、边缘整齐 

二、初筛实验

  自选择性琼脂平板上分别挑取5个以上典型或可疑菌落,分区划线卵黄琼脂平板,36℃±1℃培养。

  挑取培养18~24 h的菌落进行革兰氏染色及氧化酶试验。对于革兰氏染色阴性、氧化酶试验阴性的菌继续培养至48 h±2 h。

  对于卵磷脂酶阳性,带有虹彩环的单个菌落,接种PDA平板,36℃±1℃培养24 h±2 h。

 

卵黄琼脂(卵磷脂酶试验)

   

PDA平板

培养24h后,菌落2mm~3mm,表面光滑、湿润,培养48h后,菌落周围形成乳白色混浊环,斜射光下可见菌落及周围培养基表面呈虹彩现象。

(通常需培养3-4d才看到明显特征)

36土1℃,24-48h,菌落灰白或乳白色,光滑,边缘整齐,中心有凸起,呈草帽状。


三、生化试验

  从纯培养的PDA平板上挑取菌苔进行生化鉴定。唐菖蒲伯克霍尔德氏菌生化特征见下表。可选择生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统。


生化试验

特 征

O/F 试验(氧化型)

+

葡萄糖

+

果糖

+

木糖

+

半乳糖

+

蔗糖

-

阿拉伯糖

+

甘露醇

+

侧金盏花醇

+

肌醇

+

卫茅醇

+

动力

+

卵磷脂酶

+

氧化酶

-

尿素

+

明胶液化

+

硝酸盐还原

+

柠檬酸盐利用

+

精氨酸

+

石蕊牛乳

+

靛基质

-

V-P

-

MR

-

苯丙氨酸脱氨酶

-

H2S 产生

-

注:+表示阳性;-表示阴性。

 

唐菖蒲伯克霍尔德氏菌检验用培养基列表

用途

货号

名称

规格

增菌

HB8591 GVC增菌液

250g

分离

HB9153 改良马铃薯葡萄糖琼脂(mPDA)

250g

HB9153a 氯霉素溶液

1ml*5支

HB9153b 龙胆紫溶液 1ml*5支
HB9140 PCFA培养基 250g
HB9140a PCFA培养基添加剂 1ml*5支

初筛

HB0262 卵黄琼脂培养基基础 250g
HB8295 50%卵黄乳液 5ml*10支
HB2100 氧化酶试纸 10片
HB8278 革兰氏染色液 5ml*8

纯化

HB0233 马铃薯葡萄糖琼脂 250g

产毒培养

HB0233-2 马铃薯葡萄糖半固体琼脂 250g

生化鉴定

GB049 OF生化管 20支
GB117 葡萄糖 20支
GB144-1 果糖 20支
GB032 木糖 20支
GB152 半乳糖 20支
GB163 阿拉伯糖 20支
GB169 蔗糖 20支
  侧金盏花醇 20支
GB007 甘露醇 20支
GB105 肌醇 20支
GS008 卫茅醇 20支
GB008 半固体琼脂 20支
GS004 尿素 20支
SN039 明胶生化管 20支
SN047 硝酸盐还原 20支
GS011 西蒙氏枸橼酸盐 20支
  精氨酸 20支
HB8801 石蕊牛奶培养基 250g
GS001 蛋白胨水 20支
GS003 MR-VP生化管 20支
GB095 苯丙氨酸脱氨酶 20支
GB095a 苯丙氨酸指示剂 5ml*4
GB065 硫化氢 20支

 

 

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