一、目的要求
学习并掌握荚膜染色法．
二、基本原理
荚膜是包困在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质，其成分为多特、糖蛋白或多肽．由于荚膜与染料的亲和力弱、不易粉色；而且可溶于水，易在用水冲洗时被除去．所以通常用衬托染色法染色，使菌休和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。由于荚膜含水t 高，制片时通常不用热固定，以免变形影响观察．
下面介绍3 种荚膜染色法，其中湿墨水法较简便、并适用于各种有荚膜的细曲．
三、器材
l 菌种   揭球固氮菌或胶质芽孢杆菌约2d 无氮培养基琼脂斜面培养物。
2 染色剂 绘图墨水（上海墨水厂的沪光绘图墨水效果较好；必要时用滤纸过旅后使用）, 1 ％甲基紫水溶液．1 ％结晶紫水溶液，6 ％葡萄糖水溶液，2 嘛硫酸铜水溶液，甲醇．
3 ．仪器或其他用具载玻片，盖玻片，滤纸，显微镜等。
四、操作步骤
（一）湿墨水法
1 制备菌和口水混合液
加一滴墨水于洁净的载玻片上，然后挑取少量菌体与其混合均匀．
2 ．加盖玻片
将一洁净盖玻片盖在混合液上，然后在盖玻片上放一张渔纸，轻轻按压以吸去多余的混合液．
加盆玻片时勿．气泡，以免影响观察．
3 ．镜检
用低倍镜和高倍镜观察，若用相差显微镜观察．效果更好．
背景灰色，菌体较暗，在菌体周围呈现明亮的透明圈即为荚膜．
（二）干墨水法
l 制混合液
加一滴6 ％葡萄塘液于洁净载玻片的一端，然后挑取少量 菌体与其很合，再加一环墨水，充分混匀．
玻片必须洁净无油迹．否侧，涂片时混合液不能均匀散开
2 ．涂片
另取一端边缘光滑的载玻片作推片，将推片一端的边缘里于混合液前方，然后稍向后拉，当推片与混合液接触后，轻轻左右移动，使之沿推片接触的后缘散开，尔后以大约300 角迅速将混合液推向玻片另一端，使混合液铺成薄层
3 ．干燥
空气中自然千燥．
4 ．固定
用甲醇浸没涂片固定一分钟．倾去甲醇．
5 ．干燥
在酒精灯上方用文火干燥．
6 ．染色
用甲基紫染1~2min 
7 水洗
用自来水轻轻冲洗，自然干燥．
8 ．镜检
用低倍和高倍镜观察．
背景灰色．菌体紫色，菌体周围的清晰透明圈为荚膜．
（三）Anthony 氏法
1 ．涂片
按常规取菌涂片。
2 ．固定
空气中自然干燥。不可加热干燥固定。
3 ．染色
用l ％的结晶紫水溶液染色2 min．
4 ．脱色
以20 ％的硫酸铜水溶液冲洗．用吸水纸吸干残液．
5 ．镜检
干后用油镜观察．
菌体染成深紫色，菌体周围的荚膜呈淡紫色。
五、实验报告
l ，结果
绘图说明你所观察到的细菌的菌体和荚膜的形态：
2 ．思考题
( l ）试比较三种荚膜染色法的优缺点．
( 2 ）通过荚膜染色法染色后．为什么被包在荚膜里面的菌体着色而荚膜不着色？
   
   

 

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