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色氨酸脱氨酶的测定方法



录入时间:2020-5-11 13:58:05 来源:青岛银河澳门官网入口

1.方法一

 

   (1)培养基

L-色氨酸

3g

KH2PO4

1g

K2HPO4

1g

NaCl

5g

乙醇(95%)

10ml

蒸馏水

900ml

   加酚红至微橙的黄色(25-30mg), pH约为6.8-6.9,分装于三角瓶中,121℃蒸气灭菌20min。另将20g尿素溶于100ml水中,过滤灭菌,用无菌操作与上述热灭菌的培养基相混,并分装于无菌试管内,每管液层高约3~4cm。

   (2)接种与测定:将试验菌株的幼龄培养物接种于上述培养液中,适温培养24h,取2~4滴培养液,与1滴三氯化铁溶液(约33%)相混。如呈红褐色,则为色氨酸脱氨酶阳性反应。如无颜色变化则为阴性反应。可用变形菌作为阳性对照。

   (3)结果观察:如培养后的培养液由黄色转红色,表示有脲酶存在。如用对二甲基氨基苯甲醒试剂测定,可检查有无吲哚形成。如不拟测定脲酶,配制培养基时可不加酚红和尿素。

 

2.方法二

 

   (1)试液

L-色氨酸

0.%~0.5%

生理盐水或pH6.8缓冲液(A液与B液相混即为pH6.8的缓冲液)

A液:KH2PO4,1/5mol/L(27.2g/L)

50ml

B液:NaCO3,1/5mol(8.0g/L)

23.6ml

FeCl3

33%

   (2)接种与培养

   将试验菌接种于肉汁陈斜面,适温培养24h。

   (3)测定方法

   测定方法:取干净的试管二支,每管中加四滴L-色氨酸0.2%-0.5%溶液和四滴生理盐水(或四滴pH6.8缓冲液A和B),然后将测定菌的菌苔混到上述溶液的二支试管中制成浓菌液。另二支试管中不加菌苔作为对照。置室温15-20 min后,每管中加入一滴三氯化铁(33%)溶液,立即呈现红褐色,表示阳性反应, 不变色者表示阴性反应。可用变形菌作为阳性对照。

   本文节选自《常见细菌系统鉴定手册》第十四章。

 

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