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硝酸盐还原



录入时间:2020-5-9 14:11:34 来源:青岛银河澳门官网入口

1.培养基

 

肉汁胨培养基

1000ml

KNO3

1g

pH 7.0-7.6

 

     每管分装4-5 ml, 121℃蒸气灭菌15-20 min。

 

2.试剂

 

  (1)格里斯氏(Griess)试剂

 

A液

对氨基苯磺酸

0.5g

稀醋酸(10%左右)

150ml

B液

α-萘胺

0.1g

蒸馏水

20ml

稀醋酸(10%左右)

150ml


  (2)二苯胺试剂:二苯胺0.5g溶于100 ml浓硫酸中,用20 ml蒸馏水稀释。

 

3.接种

 

  将测定菌接种于硝酸盐液体培养基中,置适温培养1,3,5天。每株菌作二个重复,另留两管不接种作对照。

 

4.操作

 

  取二支干净的空试管或在比色瓷盘小窝中倒入少许培养l,3,5天的培养液,再各加一滴A液和B液,在对照管中同样加入A液,B液各一滴。

 

5.结果观察

 

  当培养液中滴入A,B液后,溶液如变为粉红色、玫瑰红色、橙色、棕色等表示亚硝酸盐存在,为硝酸盐还原阳性。如无红色出现,则可加一、二滴二苯胺试剂,此时如呈蓝色反应,则表示培养液中仍有硝酸盐,又无亚硝酸盐反应,表示无硝酸盐还原作用;如不呈蓝色反应,表示硝酸盐和形成的亚硝酸盐都已还原成其他物质,故仍应按硝酸盐还原阳性处理。

 

6.注意事项

 

  (1)还原硝酸盐反应是在较为厌氧条件下进行的,虽不必用矿油封液面,但分装试管时液层不宜太薄,对生长缓慢的细菌尤应注意。

  (2)对不同种的细菌来说,亚硝酸盐可以是硝酸盐还原的最终产物,也可以是整个 还原过程的中间产生,另一方面,有的种还原极为迅速,有的种还原缓慢因而第一次检查这一项目时要及时(18-24 h),并且对阴性反应的菌株应连续观察。并且对千未呈现亚硝酸盐反应的测定应检查是否仍有硝酸盐(二苯胺测定),然后才能判断有无硝酸盐的还原反应。

  本文节选自《常见细菌系统鉴定手册》第十四章。

 

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