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显微镜观察方法



录入时间:2020-5-7 15:27:26 来源:青岛银河澳门官网入口

(一)光学显微镜下观察法

 

   1.插片法 适用于观察放线菌的自然生长状态

 

   在适合菌种生长的固体培养基上,涂布接种观察的菌株,然后用摄子把灭过菌的盖玻片以45°角插入平板中,然后置适宜的生长温度培养(一般一个平板可插6~8片)。 在不同生长期取出盖玻片,用结晶紫染lmin、水洗、干燥,在光学显微镜下观察,摄像。

 

   2.盖片法

 

   用适合菌种生长的固体培养基倒平板,涂布接种上需观察的菌株,然后用无菌小刀在平板正中间切去1cm左右的琼脂块,用镊子夹一块无菌载玻片盖于有沟的琼脂平板上,置适当温度下培养。菌株会沿玻片生长。生长好后取出载玻片,结晶紫染色1 min、水洗、干燥。在光学显微镜下观察到生长完整的气生菌丝体,同时摄影。

 

(二)透射电子显微镜观察法

 

   1.材料

 

   透射电镜一台,载样铜网膜,火棉胶。

 

   2.方法

 

   (1)火棉胶准备:2g火棉胶溶于100 ml醋酸异戊酣中。

   (2)载样膜的制备:先把铜网膜用浓硫酸浸漂2min,再用水洗数次,最后将洗净的铜网膜铺在有滤纸的培养皿中。轻轻注入无菌水,取配好的火棉胶液滴一滴在水面上,由于火棉胶在水面上的表面张力形成一薄膜,将第一、二次的膜除掉,薄膜形成后迅速用吸管在培养皿的边缘处吸去水分,直至吸干,使膜紧紧贴在铜网上为止,室温干燥备用。

   (3)点样:用生长丰茂的菌株制成菌悬液,用毛细管吸取菌液并滴在铜网上。也可以用贴印法,即用制好的铜网在有气生菌丝体的菌块上轻轻印一下,然后,在光学显微镜下先检查一下网是否完整,及荫是否贴上或分布均匀。然后喷碳或投影(通常用于细菌鞭毛观察),便可在透射电子显微镜下观察或摄影。

 

(三)扫描电镜观察法

 

   扫描电镜可以观察到菌体表面的立体形象,它通过三维形象逼真地反映出样品表面结构的凹凸不平,如细菌的形态、鞭毛结构、放线菌孢子的表面装饰物等都以立体状反映出来。

 

   1.材料

 

   扫描电镜一台,临界点干燥器,白金粉,戊二醛,乙醇。

 

   2.方法

 

   菌株培养于适宜生长的平板培养基上-待生长好后用小刀切成0.5~0.7cm3的方块一然后小刀削薄→置瓷染色盆中→立即加2.5%戊二醒固定1.5h→吸去戊二醛→分别加30%、50%、70%、90%、100%乙醇各脱水15min→取出放于圆形容器中→临界点干燥1h→取出贴于一圆形铜片上→白金溅射喷锁,厚度约2~5mm→置扫描电镜下观察及摄影。

   本文节选自《常见细菌系统鉴定手册》第十二章。

 

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