（一）染剂

   1.甲液

   2.乙液

   待AgNO₃溶解后，取出10 ml备用，向其余的90 ml AgNO₃液中滴加浓氢氧化铵，则形成很浓的沉淀，再连续滴加氢氧化铵到刚溶解沉淀成为澄清溶液为止，再将取出的AgNO₃液慢慢滴入，出现薄雾，经轻摇后薄雾消失，继续滴入AgNO₃液直至薄雾刚不消失为止。

（二）玻璃片准备

   选择光滑无痕纹玻片，先用国产SDS液煮沸，为了充分接触，将玻片置特制玻片架，煮沸30 min,然后冷却，再放入洗液，浸泡过夜，用水冲去残酸，最后用蒸馏水冲洗，沥干水，再放入95％乙醇脱水，取出玻片，以火焰去乙醇，立即使用。

（三）菌种准备

   需用新的培养物，一般用新制备斜面，接种后16-24h为宜。如长期未移种，最好先连续移种活化2～3次。

（四）染色步骤

   （1）涂片：在载玻片的一端滴一滴蒸馏水，用接种环挑取斜面上少许菌苔（注意不要挑上培养基），在载玻片的水滴中轻沾几下，将玻片倾斜，使菌液缓慢流到另一端，然后平放在空气中干燥。

   （2）涂片干燥后，滴加甲液染10min,用蒸馏水冲洗，干燥或将残水沥干或用乙液冲去残水后，加乙液染30-60s,加热，使其稍冒蒸气而染液不干，冷却后用蒸馏水冲洗。

（五）结果观察

   镜检时多观察几个视野，菌体为深褐色，鞭毛为褐色。

（六）注意事项

   （1）染液最好当日配制，次日使用效果差，染出的鞭毛色浅，一般第三日不能再使用此液。此法染鞭毛适于染较多的菌株。

   （2）一定要充分洗净甲液后再加乙液，否则背景很脏。

   本文节选自《常见细菌系统鉴定手册》第十二章。

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