用途:用于纯化水中菌落总数的测定,(EP、USP、Chp标准)
配方:
酵母浸出粉
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0.5
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蛋白胨
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0.5
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酪蛋白水解物
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0.5
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葡萄糖
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0.5
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可溶性淀粉
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0.5
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磷酸氢二钾
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0.3
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无水硫酸镁
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0.024
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丙酮酸钠
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0.3
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琼脂
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15.0
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pH值7.2 ± 0.2
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25℃
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用法:将本品完整包装放置于100℃沸水中水浴20min~30min,待培养基完全溶解后冷却至45℃~50℃时,摇匀,备用。
储存条件及有效期
1.2-25℃保存。
2.本产品在储存条件下有效期为六个月。
使用方法
将本品完整包装放置于100℃沸水浴中加热20-30min,待培养基至培养基完全溶解后冷却至45℃~50℃时,撕开外层包装,在无菌环境中拧开盖子,将培养基倾入无菌平皿中,凝固后备用。
注意事项
1.若出现污染、破损、变色、泄露等现象时,则不能使用。
2.水浴加热过程中无需打开外层包装,产品内部有少量气体受热后出现膨胀为正常现象。
3.使用后的培养基应进行消毒处理。
4.本产品使用方法非强制性,如用户有具体参考资料可进行相应调整。
检验原理:
酵母浸出粉、蛋白胨、酸蛋白水解物提供氮源、维生素、生长因子;葡萄糖、为可发酵糖类;可溶性淀粉可以吸收菌在复苏过程产生的有害物质;丙酮酸钠可增强细菌的复苏。磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂;无水硫酸镁提供二价阳离子;琼脂为凝固剂。
不同药典关于纯化水的微生物检测方法和质量标准
中国药典
【检查】 微生物限度 取本品不少于 1ml,按薄膜过滤法处理后,采用 R2A 琼脂培养基,30~35℃培养不少于 5 天,依法检查(通则 1105),每1ml 供试品中需氧菌总数不得过 100cfu。
操作简述:
除葡萄糖、琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节 pH 值使加热后在 25℃的 pH值为 7.2±0.2,加入琼脂,加热溶化后,再加入葡萄糖,摇匀,分装,灭菌。 R2A 琼脂培养基适用性检查试验 照通则 1105 中“计数培养基适用性检查”的胰酪大豆胨琼脂培养基的适用性检查方法进行,试验菌株为铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌。应符合规定。
USP标准
在美国药典中,推荐使用0.45μm薄膜过滤法,并同时使用高营养培养基(平板计数琼脂培养基(PCA))于30-35℃培养72小时以上,和低营养培养基(R2A琼脂)于20-25℃培养96小时以上。检测标准为:≤100cfu/ml 。
操作简述:(可根据实际情况调整)
量取10ml充分混匀的水样,以无菌操作加入安装好的薄膜过滤器内,过滤。并用 pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量为100ml,共冲洗1次。过滤后,取出滤膜,正面朝上贴于琼脂平板上。共制备 2张滤膜,一张滤膜贴于平板计数琼脂培养基平板(高营养培养基)置30℃~35℃生化培养箱中倒置培养2~3天,计数。另一张滤膜贴于R2A琼脂平板(低营养培奍基),置20℃~25℃生化培养箱倒置培养5~7天,计数。以培养基平板上菌落数生长较多者作为检测结果, 按比例折算为1ml纯化水中的微生物数量后报告。
EP标准
在欧洲药典中使用薄膜过滤法(0.45μm 孔径滤膜),使用 R2A 琼脂培养基在 30℃~35℃培养 5 天以上。 质量标准:≤100cfu/mL。
操作简述:(可根据实际情况训整)
量取 10ml 充分混匀的水样,以无菌操作加入 安装好的薄膜过滤器内,过滤。并用 pH7.0 的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜,每张滤膜 每次冲洗量为 100ml,共冲洗 1 次。过滤后,取出滤膜,正面朝上贴于 R2A 琼脂平板上, 置 30℃~35℃生化培养箱中倒置培养 5 天,计数。按比例折算为 1ml 纯化水中的微生物数量后 报告。
微生物灵敏度试验:
按标签用法制备培养基,接种以下质控菌株,放置30-35℃需氧培养18-120小时。
相关资料:
操作视频|袋装即用型琼脂培养基使用方法-点击查看实验操作视频
R2A琼脂培养基的原理及应用 点击查看