大肠杆菌O157:H7显色培养基是青岛银河澳门官网入口公司改良的培养基,用于食品、病人粪便样品中O157:H7菌的快速检测。O157:H7菌显亮红色、淡红色或红色,菌落周围没有蓝色晕圈,大肠杆菌和大肠菌群显暗蓝色、蓝色或紫色,菌落周围有蓝色晕圈;其它细菌显蓝色、黄色或无色。本培养基的特异性高,可以克服SMAC培养基引起的假阳性和假阴性结果,是一种很理想的快速检测培养基。
成份(g/L)
特殊营养物质
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68.4
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混合显色剂
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2.6
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琼脂
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15.0
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pH7.0±0.1 25℃
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CT添加剂 1ml/支*5(已配套,无需另购)
此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。
用法
称取本品17.2g 加入200ml 蒸馏水,加热煮沸溶解并不停搅拌,加热2分钟左右。冷却至45-50℃ 时,加入一支CT添加剂混匀,倾入无菌平皿。
注意:制备好的培养基一定要保持表面干燥,可在36℃ 的培养箱中倒置放置1-2小时。
原理
利用大肠杆菌O157 自身代谢产生的酶与相应显色底物反应使菌落显色,以区分目标菌与非目标菌。显色底物是由产色因子和微生物部分可代谢物质组成,在特异性酶作用下,游离出产色因子使菌落显示一定颜色。
操作步骤
1、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液;
2、取 25 克样品液加入 225ml mEC肉汤或mTSB肉汤中,36℃ 增菌培养 18-24 小时;
3、用 3mm 接种环取 1 环增菌液,划线接种到O157菌显色培养基上,做 2 个平板;
4、36℃ 培养 18-24h,O157:H7菌显亮红色、淡红色或红色,菌落周围没有蓝色晕圈;大肠杆菌和大肠菌群显暗蓝色、蓝色或紫色,菌落周围有蓝色晕圈;其它细菌显蓝色、黄色或无色;
5、对典型菌落可做O157:H7菌血清学试验和全套生化试验。
注:必须在 36℃ 培养 24 小时内判读结果,以免菌落颜色发生变化。
质量控制
1、外观
此干燥培养基的粉末均匀,具有良好的流动性,呈灰白色。制备好的平板呈蓝色固体培养基。
2、微生物试验
在 36℃ 培养 18-24h 小时:
质控菌株
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ATCC
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生长情况
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菌落颜色
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大肠杆菌O157
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35150
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+++
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亮红色
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金黄色葡萄球菌
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25923
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-/+
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黄色或无色
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大肠杆菌
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25922
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+/-
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暗蓝色,菌落周围有蓝色晕圈
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沙门氏菌
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14028
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+++
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蓝色
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奇异变形杆菌
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12453
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+/-
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无色
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肺炎克雷伯氏菌
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10031
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+/-
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蓝色,菌落周围有蓝色晕圈
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弗氏柠檬酸盐杆菌
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43864
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+/-
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蓝色菌落有紫色中心,菌落周围有蓝色晕圈
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坂崎杆菌
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29004
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++
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紫色至蓝色
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方法的局限性
本培养基上的典型大肠杆菌O157:H7必须做血清学试验或生化试验。
典型特征
典型大肠杆菌O157:H7菌显亮红色、淡红色或红色,菌落周围没有蓝色晕圈;大肠杆菌和大肠菌群显蓝色或紫色,菌落周围有蓝色晕圈;其它细菌显蓝色、黄色或无色;
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O157显色培养基
大肠埃希氏菌O157:H7 ATCC35150
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O157显色培养基
大肠埃希氏菌O157:H7 ATCC43888
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贮存
制备好的平板可保存 2-5 天,应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处, 保存温度 2-8℃,注意避光保存。
失效
干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。
注意
此培养基仅供实验室使用。
参考文献
1、Rappaport, F., and E. Henig. 1952. Media for the isolation and differentiation of pathogenic Escherichia coli (serotypes 0111 and 055). J. Clin. Pathol. 5:361-362.
2、 U.S. Food and Drug Administration. 1995. Bacteriological analytical manual, 8 th ed., AOAC International, Gaithersburg, MD.
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O157显色培养基的微生物灵敏度试验:
按标签用法制备培养基,接种以下质控菌株,放置36±1℃需氧培养18-24小时。
相关资料:
操作视频|培养基的加热灭菌操作(以XLD 、SC为例)-点击查看实验操作视频
使用说明书 点击下载